安捷倫液相色譜儀的常見(jiàn)故障及解決方法
安捷倫液相色譜儀是利用混合物在液-固或不互溶的兩種液體之間分配比
的差異，對(duì)混合物進(jìn)行先分離，而后分析鑒定的儀器。由于安捷倫液相色譜儀
HPLC具有高分辨率、高靈敏度、速度快、色譜柱可反復(fù)利用，流出組分易收集
等優(yōu)點(diǎn)，因而被廣泛應(yīng)用到生物化學(xué)、食品分析、醫(yī)藥研究、環(huán)境分析、無(wú)機(jī)
分析等各種領(lǐng)域。但是由于人員素質(zhì) 樣品的性質(zhì)以及儀器本身等方面的原
因, 常常出現(xiàn)這樣那樣的分析故障嚴(yán)重影響了正常的生產(chǎn)分析。所以掌握一種
準(zhǔn)確、快速的排除儀器故障的方法非常重要。
安捷倫液相色譜儀的常見(jiàn)故障及解決方法：
1.柱壓高
可能原因：（1）.緩沖液鹽分如（乙酸銨等）沉積于柱內(nèi)；
（2）.樣品污染沉積；
處理對(duì)于*種情況先用40～50℃的純水，低速正向沖洗柱子，待柱壓
逐漸下降后，相應(yīng)提高流速?zèng)_洗，柱壓大幅度下 降后，用常溫純水沖洗，之
后用純甲醇沖洗柱子30分鐘；對(duì)于第二種情況，由樣品的沉積引起污染的C18
柱，和純水反向沖洗柱子，換成甲醇沖洗，接著用甲 醇+異丙醇（4+6）沖洗
柱子，再用換成甲醇沖洗，然后用純水沖洗，后甲醇沖洗正向沖洗柱子30分
鐘以上。
2.指示
可能原因：（1）.泵密封墊圈磨損；
（2）.大量氣泡進(jìn)入泵體。
處理對(duì)于*種情況，更換密封墊圈；對(duì)于第二種情況，在泵作用的同
時(shí)，用一個(gè)50ml的玻璃針筒在泵的出口處幫助抽出空氣。
3.不穩(wěn)定
原因系統(tǒng)中有空氣或者單向閥的寶石球和閥座之間夾有異物，使得兩者不能密封。
處理工作中注意觀察流動(dòng)相的量，保證不銹鋼濾器沉入儲(chǔ)液器瓶底，避免吸
入空氣，流動(dòng)相要充分脫氣。如為單向閥和閥座之間夾有異物，拆下單向閥，
放入盛有丙酮的燒杯用超聲波清洗。
4.峰分叉
可能原因：（1）、色譜柱被污染；
（2）、柱頭填料塌陷；
處理對(duì)于*種情況，先用純水反向沖洗柱子，然后換成甲醇沖洗，接著
用甲醇+異丙醇（4+6）沖洗柱子（沖洗時(shí)間的 長(zhǎng)短由樣品污染的情況而
定），再換成甲醇沖洗，然后用純水沖洗，后甲醇沖洗正向沖洗柱子30分鐘
以上。如沖洗后依然出峰不佳，則考慮第二種情況。對(duì)于第 二種情況，擰開
柱頭，檢查柱填料是否硬結(jié)或塌陷。去除硬結(jié)部分（污染的填料），裝入新填
料，滴一滴甲醇，填料下陷，再填，用與柱內(nèi)徑相同的頂端平滑的不銹 鋼桿
壓緊，再填平，滴甲醇，再壓緊反復(fù)幾次，直至裝滿填平。柱頭用甲醇沖洗干
凈，擦凈柱外壁的填料，擰緊柱頭，用純甲醇沖洗30分鐘以上。
5.重復(fù)性差
可能原因：（1）、進(jìn)樣閥漏液；
（2）、加樣針不到位；
（3）、液量不足；
處理對(duì)于*種情況更換進(jìn)樣閥墊圈；對(duì)于第二種情況保證加樣針插到
底，注射樣品溶液后須快速、平穩(wěn)地從LOAD狀態(tài) 轉(zhuǎn)換到INJECT狀態(tài)，以保證
進(jìn)樣量的準(zhǔn)確。日常工作中，液相色譜儀的保養(yǎng)非常重要，注意不要讓空氣進(jìn)
入輸液系統(tǒng)和高壓泵中，儲(chǔ)液器內(nèi)的溶液如長(zhǎng)時(shí)間未 用應(yīng)清洗儲(chǔ)液器并更換
溶液，每次用完色譜儀后緩沖液要用純水沖洗干凈，防止無(wú)機(jī)鹽析出或沉積；
樣品的前處理也很重要，任何樣品都要盡可能地去除雜質(zhì)，*溶解，盡量減
少對(duì)色譜柱的污染，以延長(zhǎng)色譜柱的使用壽命，同時(shí)避免注射過(guò)濃的樣品溶
液，以免殘留液在進(jìn)樣閥內(nèi)析出固體引起堵塞；色譜柱作好標(biāo)記，用于不同分
析目的的色譜柱不要混用等。
6.其他原因及處理方法
故障類型 | 可能的原因 | 解決方案 |
基線噪聲大 | 隨機(jī)性－ 污染物積聚沖 | 沖洗柱；凈化樣品；使用HPLC 級(jí)溶劑 |
連續(xù)性－ 檢測(cè)器燈故障 | 更換紫外燈（壽命為1000 小時(shí)） | |
偶然性－ 外部電氣干擾 | 使用LC 系統(tǒng)穩(wěn)壓器 | |
樣品量過(guò)大 | 進(jìn)樣量應(yīng)為流動(dòng)相進(jìn)樣量的1/6 | |
雙峰 | 樣品量過(guò)大 | 進(jìn)樣量應(yīng)為流動(dòng)相進(jìn)樣量的1/6 |
進(jìn)樣溶劑過(guò)強(qiáng) | 使用較弱的進(jìn)樣溶劑或流動(dòng)相 | |
濾芯堵塞 | 更換并使用0.5 μm 孔隙率的在線過(guò)濾器 | |
柱有空隙或氣溝 | 用玻璃珠或填料填充空隙；重填柱 | |
進(jìn)樣器流路不通暢 | 更換進(jìn)樣器轉(zhuǎn)子 | |
柱頭有空隙 | 使用填料或玻璃珠填充柱頂部 | |
柱上樣品超載 | 使用更高負(fù)載量的固定相 增加色譜柱內(nèi)徑 減少樣品量 | |
單峰－ 存在干擾性組分 | 凈化樣品；預(yù)分離 | |
拖尾峰 | 開始出雙峰 | 請(qǐng)參見(jiàn)雙峰 |
存在未掃的死體積 | 減少接頭的數(shù)量 確保進(jìn)樣器密封墊緊密 確保接頭正確固定 | |
堿性化合物－ 硅醇相互作用 | 換成聚合物固定相 | |
堿性物質(zhì)－ 硅醇相互作用 | 使用更強(qiáng)的流動(dòng)相或添加競(jìng)爭(zhēng)堿（例如，*胺 | |
硅膠基－ 柱降解 | 使用特種色譜柱；聚合物柱或空間位阻 | |
峰展寬 | 進(jìn)樣量過(guò)大 | 降低進(jìn)樣溶劑的強(qiáng)度以集中溶質(zhì) |
進(jìn)樣閥中的峰擴(kuò)散 | 在進(jìn)樣前/后引入氣泡以減少擴(kuò)散 | |
數(shù)據(jù)系統(tǒng)的采樣速率過(guò)低 | 增大采樣 | |
檢測(cè)器時(shí)間常數(shù)低 | 調(diào)節(jié)時(shí)間常數(shù)使之與峰寬匹配 | |
流動(dòng)相粘度過(guò)高 | 提高柱溫 | |
檢測(cè)器池容積過(guò)大 | 使用盡可能小的池容積（系統(tǒng)中無(wú)熱交換器） | |
注射器體積過(guò)大 | 減少進(jìn)樣量 | |
保留時(shí)間長(zhǎng) | 使用梯度洗脫或較強(qiáng)的流動(dòng)相 | |
壓力波動(dòng) | 單向閥泄漏 | 更換單向 |
泵密封墊泄漏 | 更換泵密封 | |
微粒積聚 | 過(guò)濾樣品；在線過(guò)濾器；過(guò)濾流動(dòng)相 | |
壓力漸增 | 微粒積聚 | 過(guò)濾樣品；在線過(guò)濾器；過(guò)濾流動(dòng)相 |
水/有機(jī)系統(tǒng)－ 緩沖液沉淀 | 測(cè)試緩沖液-有機(jī)混合物；確保兼容性 | |
保留超出總滲透體積 | 體積排阻－ 特異性相互作用 | 添加流動(dòng)相改性劑或更改溶劑 |
保留時(shí)間不斷變動(dòng) | 柱溫不斷變化 | 使柱恒溫；絕緣；保證實(shí)驗(yàn)室溫度恒定 |
平衡時(shí)間不足以適應(yīng)梯度洗脫要求，或等度洗脫流動(dòng)相起變化 | 確信在溶劑改變或梯度結(jié)束后至少10 個(gè)柱容積通過(guò)色譜柱 | |
流動(dòng)相組分選擇性蒸發(fā) | 減少氦氣的劇烈脫氣；保持溶劑貯器蓋好；制備新的流動(dòng)相 | |
緩沖能力不足 | 用>20 mM 濃度的緩沖液 | |
在線流動(dòng)相混合不一致 | 保證梯度系統(tǒng)輸送恒定組成；與手動(dòng)制備流動(dòng)相核對(duì) | |
污染積聚 | 沖洗色譜柱以去除污染物 | |
初幾次進(jìn)樣— 吸附在活性部位 | 用濃樣品進(jìn)樣沖洗柱，使其處于正常狀態(tài) | |
保留時(shí)間逐漸縮短 | 流速在增加 | 檢查泵以確保正確；否則需重調(diào) |
柱上進(jìn)樣超載 | 減少樣品 | |
鍵合固定相的流失 | 保持流動(dòng)相pH 值在2-8.5 間 | |
保留時(shí)間逐漸增加 | 流速在減慢 | 解決液流中的漏液現(xiàn)象，更換泵密封墊，檢查泵的渦流和氣泡 |
硅膠填料的活化點(diǎn) | 使用流動(dòng)相改性劑 | |
鍵合固定相的流失 | 保持流動(dòng)相pH 值在2-8.5 間 | |
流動(dòng)相組成在變化 | 確保流動(dòng)相容器蓋好 | |
硅膠填料的活化點(diǎn) | 流動(dòng)相中加競(jìng)爭(zhēng)堿 | |
硅膠填料的活化點(diǎn) | 固定相用更高覆蓋度的填充料 | |
靈敏度問(wèn)題 | 峰位于檢測(cè)器線性范圍之外 | 稀釋或濃縮使之處于線性區(qū)內(nèi) |
初幾次進(jìn)樣—樣品在樣品池或柱中被吸附自動(dòng)進(jìn)樣器 流路阻塞 | 用濃樣品處理樣品池/柱 | |
自動(dòng)進(jìn)樣器流路阻塞 | 檢查流量情況，確保無(wú)阻塞現(xiàn)象 | |
進(jìn)樣器樣品定量管未充滿 | 確保樣品池中已充滿樣品 | |
在樣品制品時(shí)有關(guān)的樣品流失 | 用內(nèi)標(biāo)法在制備樣品，優(yōu)化樣品制備方法 | |
柱平衡時(shí)間減慢（離子對(duì)現(xiàn)象） | 長(zhǎng)鏈離子對(duì)試劑平衡時(shí)間慢 | 使用較短的烷鏈試劑 |
掃一掃,關(guān)注我們
